副溶血性弧菌食物中毒诊断技术

（一）检验方法

1.样品采集

以无菌方法采取具代表性的样品，置灭菌的容器内。一般采集患者粪便、呕吐物和中毒的可疑原因食品。常见可疑的食品有鱼、虾、蟹、贝等海产品及其他有关的食品。若上述食品均为煮熟品，也可检验它们的包装物、烹调用具等。

副溶血弧菌不宜在低温环境中生存，故采集到的样品应尽快送往实验室，不宜冷冻保存运送，以免影响检验结果。

2.分离培养

副溶血弧菌营养要求不高，普通培养基、蛋白胨水中均可生长。在含盐3.5%的培养基上生长良好，0.5%盐时可生长，12%以上及无盐的培养基中不能生长。发育温度为30-37~c，以37~c最佳。生长的ph范围是7.0-9.5，最适ph为7.7～8.0，需氧性强，厌氧生长很缓慢。多数菌株于肉汤、蛋白胨水等培养基中呈浑浊表面形成菌膜。r型菌发生沉淀。厌氧培养48h以上，才见生长。固体培养基上菌落常呈圆形隆起，不透明，表面光滑、湿润，多数菌株继代后，呈不正圆。粗糙型菌落，灰白半透明或不透明，在emb琼脂上不生长。某些菌株在麦康凯培养基上不生长。生长者，其菌落为圆形、平坦、半透明或浑浊略带红色。从腹泻病例初次分离到的菌落多较典型一般不形成色素。食品中分离到的菌株，多为r型。胆酸盐稍有阻止该菌扩散的作用，血平板上可见溶血环。在氯化钠蔗糖平板上菌落呈绿色。s.s琼脂上菌落中等大，无色透明、扁平、有动性，不易被接种环挑起。该菌对乙酸，90%以上菌株对0/129抑制弧2，4-二氨基-6，7-二异丙基喋啶）敏感。该菌的溶血作用是因其具有耐热性溶血素，这种溶血素是相对分子质量约为42000的酸性蛋白质，对心脏有毒性，是一种即时型致死毒。

（二）动物试验

经上述试验符合副溶血性弧菌的菌株接种于3.5%nacl蛋白胨水中，经16-18h培养后，小鼠腹腔注射0.3ml，观察2-3天。小鼠症状为竖毛，不活泼，食欲不振，腹部贴饲养罐底，呼吸困难，步态蹒跚有时呈痉挛性跳动、四肢抽搐及尾部痉挛性振动，多于24-48h内死亡，将死亡小鼠作剖检与分离培养。